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穿梭箱實(shí)驗(yàn)在小鼠主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的作用
點(diǎn)擊次數(shù):2154 更新時(shí)間:2020-03-16

目前,對(duì)于該腦區(qū)在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的調(diào)節(jié) 機(jī)制尚未*明確。目的:探索中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)氨基丁酸 (y-Aminobutyric acid,GABA)能神經(jīng)元在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中的調(diào)控作用。 法:通過穿梭箱實(shí)驗(yàn),對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行主動(dòng)回避訓(xùn)練;通過早期即刻基 因c-fos免yi熒光染色確定小鼠PAG內(nèi)c-fos表達(dá)的變化;利用腦立體定位 注射,將攜帶有hM3Dq或hM4Di基因的重組腺相關(guān)病毒定位注射于 Vgat-cre轉(zhuǎn)基因小鼠的PAG內(nèi),待2-3周后GABA能神經(jīng)元穩(wěn)定表達(dá)hM3Dq 或hM4Di。制備300|im厚度的PAG離體腦片,進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗記錄, 記錄CNO對(duì)GABA能神經(jīng)元活動(dòng)的調(diào)節(jié)。應(yīng)用化學(xué)遺傳學(xué)技術(shù),在清醒 小鼠體內(nèi)特異性激活或者抑制PAG的GABA能神經(jīng)元,觀察改變GABA 能神經(jīng)元的活動(dòng)對(duì)小鼠主動(dòng)回避學(xué)習(xí)能力的影響;結(jié)果:Vgat-ChR2-EYFP 轉(zhuǎn)基因小鼠在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中存在延遲建立的特性;主動(dòng)回避學(xué)習(xí)中,與 正常小鼠相比,建立遲緩的小鼠PAG內(nèi)GABA能神經(jīng)元激活的數(shù)量增多;PAG內(nèi)表達(dá)hM3Dq的GABA能神經(jīng)元被其配體**氯氮平-N-氧化物 (Clozapine-N-oxide,CNO)特異性激活,動(dòng)作電位發(fā)放頻率增加,表達(dá) hM4Di的GABA能神經(jīng)元被CNO特異性抑制,神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏陌l(fā)放頻 率降低;在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)過程中,使用CNO特異性激活PAG的GABA能 神經(jīng)元可以延緩主動(dòng)回避學(xué)習(xí)過程,使用CNO特異性抑制PAG的GABA

 

能神經(jīng)元并不影響主動(dòng)回避行為的建立。結(jié)論Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基因小 鼠存在主動(dòng)回避學(xué)習(xí)障礙,PAG的GABA能神經(jīng)元調(diào)節(jié)主動(dòng)回避行為的建 立,激活PAG的GABA能神經(jīng)元可以起到延緩主動(dòng)回避行為建立的作用。